方法身份
- 现行版
- HJ 1001-2018
- 名称
- 水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法
- 发布日期
- 2018-12-26
- 实施日期
- 2019-06-01
- 状态
- 现行（本标准为首次发布（前言）） · 2026-11-02 核查
- 相关标准
- HJ/T 91、HJ 494、GB/T 14581（点位与采样，见 8.1）
适用范围
- 适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定。（第 1 章）
- 方法检出限 10 MPN/L。（第 1 章）
- 含活性氯的样品在采样瓶灭菌前加硫代硫酸钠溶液（每 125 mL 容积 0.1 mL）；重金属离子含量较高的样品加乙二胺四乙酸二钠溶液（每 125 mL 容积 0.3 mL）。（5.1、5.2、8.1）
- 采样瓶不得用样品洗涤；采样量一般为采样瓶容量的 80% 左右。（8.1）
- 采样后 2 h 内检测，否则 10 ℃ 以下冷藏但不得超过 6 h；实验室接样后不能立即检测的，4 ℃ 以下冷藏并在 2 h 内检测。（8.2）
原理：总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌在特定温度下培养时产生 β-半乳糖苷酶，把无色的 ONPG 分解为黄色的邻硝基苯酚；大肠埃希氏菌同时产生 β-葡萄糖醛酸酶，把 MUG 分解为在紫外灯下发荧光的 4-甲基伞形酮。统计阳性孔数查 MPN 表计算浓度（第 4 章）。
计算公式与符号说明
样品中总大肠菌群、粪大肠菌群或大肠埃希氏菌浓度（10.1 式(1)）
C = MPN 值 × 1000 ÷ f
- C
- 样品中总大肠菌群、粪大肠菌群数或大肠埃希氏菌浓度，MPN/L
- MPN 值
- 按大孔、小孔阳性格数从附录 B 表 B.1 查得的每 100 mL 样品中的浓度，MPN/100 mL
- 1000
- 将 C 单位由 MPN/mL 转换为 MPN/L
- f
- 最大接种量（未稀释为 100 mL，1:10 稀释即 10 mL，依此类推），mL
MPN 值须查原文附录 B 的 97 孔定量盘 MPN 表，95% 置信区间见附录 C；本页不转载该表。
结果表示
- 测定结果保留两位有效数字；结果 ≥100 MPN/L 时以科学计数法表示。（10.2）
- 进舍规则标准未规定，按 GB/T 8170 从未修约值一次修约到位。（机构规定）
- 97 孔均为阴性时，报告为未检出或 <10 MPN/L。（10.2）
计算示例（合成数据）
以下数据为合成数据，只演示计算过程，不是任何样品的测量值。每个计算值都由立方 LIMS 产品同一套公式引擎（十进制运算）在网站构建时算出，修约按本页“结果表示”写明的规则；页面上的每个计算值另用一套不经模板与引擎的独立程序，按标准原文公式从本页列出的输入复算一致。
完整计算：河流水样 1:10 稀释接种（合成数据）
河流水样按表 1 选 10 mL 接种量：取 10 mL 样品加入 90 mL 无菌水制成 1:10 稀释样品，加培养基后装盘，37 ℃ 培养 24 h 测总大肠菌群。读数：大孔阳性 21 格、小孔阳性 6 格，查附录 B 表 B.1 得 MPN 值 34.5 MPN/100 mL。
- 式(1)：C = 34.5 × 1000 ÷ 10 = 3450 MPN/L
- 保留两位有效数字（10.2）：拟舍部分为 50、保留末位 4 为偶数，舍去，得 3400 MPN/L
- 结果 ≥100 MPN/L，以科学计数法报出：3.4×10³ MPN/L（10.2）
低浓度与未检出：地下水原样接种（合成数据）
地下水按表 1 直接取 100 mL 原样接种。大孔阳性 2 格、小孔阳性 1 格，查表 B.1 得 MPN 值 3.0 MPN/100 mL。
- 式(1)：C = 3.0 × 1000 ÷ 100 = 30 MPN/L，两位有效数字报 30 MPN/L；小于 100，不用科学计数法（10.2）
- 结果不低于检出限 10 MPN/L（第 1 章）：符合
- 若同一样品 97 孔全部阴性（表 B.1 中 0 大孔、0 小孔为 <1.0），按 10.2 报告未检出或 <10 MPN/L，不按式(1)换算出一个数值。
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质量控制要求
| 要求 | 条款 |
|---|---|
| 每次试验用无菌水按 9.1～9.3 做实验室空白，培养后定量盘不得有任何颜色反应，否则该次测定结果无效，查明原因后重测 | 9.4.1、12.1 |
| 阴性、阳性对照：标准菌株制成 300～3000 个/mL 的菌悬液同法操作，阳性菌株呈阳性、阴性菌株呈阴性，否则该次测定结果无效；定期使用有证标准菌株做对照试验 | 9.4.2、12.1 |
| 每 20 个样品或每批次（≤20 个/批）测定一个平行双样 | 12.2 |
| 每批次培养基须使用有证标准菌株进行培养基质量检验 | 12.3 |
| 培养温度：总大肠菌群和大肠埃希氏菌 37 ℃±1 ℃，粪大肠菌群 44.5 ℃±0.5 ℃，均培养 24 h | 9.3、7.3 |
| 培养 24 h 判读；结果可疑可延长至 28 h，超过 28 h 后出现的颜色反应不作为阳性结果 | 9.4.3 |
| 装盘封口后颜色类似或深于标准阳性比色盘的，排查样品、培养基、无菌水等因素后终止试验或重新操作 | 9.2 |
常见错误
- 稀释后忘记按最大接种量换算。表 B.1 查到的是每 100 mL 接种液的 MPN 值。1:10 稀释接种时 f 为 10 mL，式(1)要除以 10 而不是 100；按 100 计算，结果小 10 倍（由式(1)推出）。
- 接种量选得太大或太小。9.1 要求按污染程度选接种量，避免定量盘出现全部阳性或全部阴性；未知样品可选用多个接种量。全部阳性时表 B.1 只给出“>2419.6”，全部阴性按 10.2 只能报未检出或 <10 MPN/L，两种情况都得不到具体数值（由表 B.1、10.2 推出）。
- 超过 28 h 才判读。9.4.3 规定培养 24 h 判读，结果可疑可延长至 28 h，超过 28 h 后出现的颜色反应不作为阳性结果。把超时出现的黄色计入阳性孔，阳性格数增多，从表 B.1 查得的 MPN 值随之变大（由表 B.1 推出）。
- 大肠埃希氏菌不看荧光。大肠埃希氏菌阳性要同时变黄并在 365～366 nm 紫外灯下有蓝色荧光（9.4.3、7.5）；只变黄判为总大肠菌群或粪大肠菌群阳性。只按黄色计数，阳性格数包含了不发荧光的孔，查表 B.1 得到的值偏大（由 9.4.3 与表 B.1 推出）。
- 含余氯样品不加硫代硫酸钠。5.1 指出活性氯能破坏微生物细胞内的酶活性、导致细胞死亡，可在采样时加硫代硫酸钠溶液消除干扰；8.1 要求采集含活性氯的样品时，在采样瓶灭菌前按每 125 mL 容积 0.1 mL 加入硫代硫酸钠溶液。
- 样品放置超时。8.2 要求采样后 2 h 内检测，否则 10 ℃ 以下冷藏且不得超过 6 h；实验室接样后不能立即检测的，4 ℃ 以下冷藏并在 2 h 内检测。超出这些时限的样品不符合 8.2 的保存要求。
官方原文
公式、条款与限值以官方原文为准：生态环境部 标准文本页（HJ 1001-2018 发布稿 PDF）。本页只写要点并注明条款号，不转载标准原文。
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