方法身份
- 现行版
- HJ 347.2-2018
- 名称
- 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法
- 发布日期
- 2018-12-26
- 实施日期
- 2019-06-01
- 代替
- HJ/T 347-2007（多管发酵法部分；HJ/T 347-2007 自本标准实施之日起废止）
- 状态
- 现行 · 2026-11-02 核查
- 相关标准
- GB/T 14581、HJ 494、HJ/T 91（采样，见 8.1）
适用范围
- 适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的测定。（第 1 章）
- 检出限：12 管法 3 MPN/L，15 管法 20 MPN/L。（第 1 章）
- 15 管法：10 mL、1 mL、0.1 mL 各接种 5 管，受污染样品先稀释再按同样方式接种（接种量参考原文表 1）；12 管法：2 份 100 mL、10 份 10 mL，用于生活饮用水等清洁水体。（9.1.1、9.1.2）
- 含活性氯的样品在采样瓶灭菌前加硫代硫酸钠溶液，重金属含量高的加乙二胺四乙酸二钠溶液。（5.1、5.2、8.1）
- 采样后 2 h 内检测，否则 10 ℃ 以下冷藏但不得超过 6 h；实验室接样后不能立即检测的，4 ℃ 以下冷藏并在 2 h 内检测。（8.2）
原理：样品接种于乳糖蛋白胨培养基，37 ℃ 初发酵，产酸使溴甲酚紫由紫变黄、倒管内产气；再于 44.5 ℃ 复发酵，胆盐三号抑制革兰氏阳性菌，最后产气的确定为粪大肠菌群，查 MPN 表得出浓度（第 4 章）。
计算公式与符号说明
15 管法粪大肠菌群数换算（10.1 式(1)）
C = MPN 值 × 100 ÷ f
- C
- 样品中粪大肠菌群数，MPN/L
- MPN 值
- 每 100 mL 样品中粪大肠菌群数（按复发酵阳性组合查原文附录 A 表 A.2），MPN/100 mL
- 100
- 10 × 10 mL：10 把 MPN/100 mL 换算为 MPN/L，10 mL 为 MPN 表中最大接种量
- f
- 实际样品最大接种量（稀释样品按折算的原样量，如稀释 10⁴ 倍后接种 10 mL，f = 0.001），mL
12 管法不用换算：按 100 mL 和 10 mL 的复发酵阳性数查原文附录 A 表 A.1，直接得到每升样品的 MPN 值（10.1）。15 管法如有超过三个稀释度用于检验，按表 A.2 注 2 选三个连续稀释度的阳性组合查表。
结果表示
- 测定结果保留至整数位，最多保留两位有效数字；≥100 MPN/L 时以科学计数法表示（如 1100 写作 1.1×10³）。（10.2）
- 低于检出限时，12 管法以“未检出”或“<3 MPN/L”、15 管法以“未检出”或“<20 MPN/L”表示。（10.2）
- 有效数字的进舍规则标准未规定，本机构按 GB/T 8170 修约。（机构规定）
- 查表结果为表上限（12 管法“>230”、15 管法“≥2400”）时没有确切值。标准未规定这种情况的处理与报出写法；本机构做法是加大稀释度重新测定。（附录 A 表 A.1、表 A.2；机构规定）
计算示例（合成数据）
以下数据为合成数据，只演示计算过程，不是任何样品的测量值。每个计算值都由立方 LIMS 产品同一套公式引擎（十进制运算）在网站构建时算出，修约按本页“结果表示”写明的规则；所用公式就是本库专用模板里的那一份；页面上的每个计算值另用一套不经模板与引擎的独立程序，按标准原文公式从本页列出的输入复算一致。
完整计算：15 管法、未稀释与稀释样品（合成数据）
初发酵 37.0 ℃、24 h，复发酵 44.5 ℃、23.5 h；空白对照无变色。下表为复发酵阳性管数与查表 A.2 所得 MPN 值。
| 样品 | 最大接种量 f（mL） | 阳性管数（三个接种量） | 表 A.2 MPN/100 mL |
|---|---|---|---|
| 合成-FC1 | 10 | 5-3-1 | 110 |
| 合成-FC2 | 0.01 | 4-1-0 | 17 |
| 合成-FC3 | 10 | 0-1-0 | 2 |
| 合成-FC4 | 10 | 0-0-0 | <2 |
- 合成-FC1（未稀释，f = 10 mL）：式(1) C = 110 × 100 ÷ 10 = 1100 MPN/L → 两位有效数字为 1100，≥100，报告写作 1.1×10³ MPN/L
- 合成-FC2（稀释 10³ 倍后接种 10 mL，f = 0.01 mL）：C = 17 × 100 ÷ 0.01 = 170000 MPN/L → 报告写作 1.7×10⁵ MPN/L
- 合成-FC3：C = 2 × 100 ÷ 10 = 20 MPN/L，恰为 15 管法检出限，报 20 MPN/L
- 合成-FC4：复发酵全阴性（0-0-0），表 A.2 为“<2”，没有确切值，记录不出数值：提醒；按 10.2 报“未检出”或“<20 MPN/L”
- 培养条件：初发酵 37 ℃ ± 0.5 ℃、24 h ± 2 h（9.2）：符合、符合；复发酵 44.5 ℃ ± 0.5 ℃、24 h ± 2 h（9.3）：符合、符合；空白对照（12.2.1）：符合
修约与表限：12 管法（合成数据）
清洁水体用 12 管法：2 份 100 mL、10 份 10 mL。本批更换了培养基批次，同时做了阳性、阴性菌株检验。
- 合成-FC5：100 mL 阳性 2 瓶、10 mL 阳性 8 管，查表 A.1 得 161 MPN/L → 最多两位有效数字，拟舍部分为 1，舍去，160，≥100，报告写作 1.6×10² MPN/L
- 合成-FC6：2 瓶、9 管，查表得 230 MPN/L → 报告写作 2.3×10² MPN/L；合成-FC7：1 瓶、0 管，查表得 4，<100，保留至整数位，报 4 MPN/L
- 合成-FC8：全阴性，表 A.1 为“<3”，报“未检出”或“<3 MPN/L”；合成-FC9：2 瓶、10 管全阳性，表 A.1 为“>230”，没有确切值，按本机构规定加大稀释度重新测定：提醒
- 录入的 MPN 值与表 A.1 逐格核对：符合；更换培养基批次时阳性、阴性菌株检验（12.1）：符合
质控不合格：空白、培养条件、查表和管数录入（合成数据）
同一批里放进多种常见问题，看每一项怎么判。
- 空白对照试管出现变色（12.2.1）：不符合，该次样品测定结果无效
- 初发酵温度 38.0 ℃，超出 37 ℃ ± 0.5 ℃（9.2）：不符合；复发酵 28 h，超出 24 h ± 2 h（9.3）：不符合；转接后未在 30 min 内放入培养箱（9.3）：不符合
- 更换了培养基批次却没做阳性、阴性菌株检验（12.1）：不符合
- 合成-FC10：1 瓶、4 管，表 A.1 应为 24，记录写了 18：不符合，须重新查表
- 合成-FC11：10 mL 复发酵阳性 3 管，多于初发酵阳性（含疑似）2 管——只有初发酵阳性或疑似阳性管才转接复发酵（9.3）：不符合
质量控制要求
| 要求 | 条款 | 在立方 LIMS 模板里 |
|---|---|---|
| 每次试验用无菌水做实验室空白（按 9.1～9.3 操作），培养后试管不得有任何变色反应，否则该次结果无效 | 9.4.1、12.2.1 | 空白变色时本批结果判无效 |
| 定期做阳性（如大肠埃希氏菌）及阴性（如产气肠杆菌）菌株对照，菌悬液 300～3000 MPN/L；反应不符时该次结果无效 | 9.4.2、12.2.2 | 对照不符时本批结果判无效 |
| 更换不同批次培养基时做阳性和阴性菌株检验 | 12.1 | 未做或不合格时记录不能提交 |
| 初发酵 37 ℃ ± 0.5 ℃ 培养 24 h ± 2 h；复发酵 44.5 ℃ ± 0.5 ℃ 培养 24 h ± 2 h，转接后 30 min 内全部放入培养箱或水浴锅（原文 7.3 写恒温培养箱或水浴锅允许温度偏差 37 ℃ ± 0.5 ℃、44 ℃ ± 0.5 ℃；9.3 写复发酵在 44.5 ℃ ± 0.5 ℃ 下培养） | 9.2、9.3 | 超出时本批结果判无效 |
| 只有初发酵阳性或疑似阳性（只产酸未产气）的试管转接复发酵；复发酵倒管产气证实为阳性 | 9.3 | 复发酵阳性数多于初发酵时记录不能提交 |
常见错误
- 15 管法稀释样品的 f 记错。式(1)的 f 是实际样品最大接种量。样品先稀释 10⁴ 倍再接种 10 mL，f 应为 0.001 mL，不是 10 mL。f 记错一位，结果差 10 倍。
- 12 管法结果再乘一次换算系数。12 管法查表 A.1 直接得到每升样品的 MPN 值（10.1），不用式(1)。把表 A.1 的值当成 MPN/100 mL 再乘 10，结果大 10 倍。
- ≥100 MPN/L 不按科学计数法、保留位数过多。10.2 要求最多两位有效数字，≥100 MPN/L 时以科学计数法表示。把 161 直接写成 161，或把 170000 写成六位整数，都不符合报出要求，应分别写作 1.6×10² 和 1.7×10⁵。
- 转接后拖延放入培养箱。9.3 要求转接后所有试管必须在 30 min 内放进恒温培养箱或水浴锅，在 44.5 ℃ ± 0.5 ℃ 下培养 24 h ± 2 h。超过 30 min 或温度超出范围，不符合 9.3。
- 超过保存时间才接种。8.2 要求采样后 2 h 内检测，否则 10 ℃ 以下冷藏但不得超过 6 h；实验室接样后不能立即检测的，4 ℃ 以下冷藏并在 2 h 内检测。超过时限的样品不符合 8.2。
- 含余氯的样品没加硫代硫酸钠。原文 5.1：活性氯能破坏微生物细胞内的酶活性、导致细胞死亡，可在采样时加硫代硫酸钠溶液消除干扰。8.1 要求含活性氯的样品在采样瓶灭菌前加硫代硫酸钠溶液（每 125 mL 容积加 0.1 mL）。
原始记录预览
立方 LIMS 模板库里按本标准预置的原始记录《粪大肠菌群测定检验记录（HJ 347.2-2018）》包含以下内容（只读预览，不提供空白表下载）。字段、仪器与质控项按模板草稿列出，未经持证人员抽检；标“模板口径”的项含模板自定的算法、取值或判定方式，标准原文没有逐字这样规定；与上文不一致处，以上文和标准原文为准：
- 基本信息
- 分析批/任务、检验日期时间、检验方法、乳糖蛋白胨培养基（批号）、EC 培养基（批号）、本次更换了培养基批次、培养基灭菌温度
- 仪器设备
- 高压蒸汽灭菌器（115℃、121℃可调）、恒温培养箱或水浴锅（37℃±0.5℃、44℃±0.5℃）
- 培养条件
- 初发酵培养开始时间、初发酵培养结束时间、初发酵培养温度、转接后 30 min 内全部放入培养箱/水浴锅、复发酵培养开始时间、复发酵培养结束时间、复发酵培养温度
- 培养时长
- 初发酵培养时长、复发酵培养时长
- 对照试验
- 空白对照（无菌水）试管无任何变色反应、阳性菌株呈阳性反应、阴性菌株呈阴性反应
- 样品检验
- 样品编号、12 管法：100 mL 初发酵阳性（含疑似）瓶数、12 管法：10 mL 初发酵阳性（含疑似）管数、12 管法：100 mL 复发酵阳性瓶数、12 管法：10 mL 复发酵阳性管数、15 管法：实际样品最大接种量 f、15 管法：最大接种量初发酵阳性（含疑似）管数、15 管法：中间接种量初发酵阳性（含疑似）管数、15 管法：最小接种量初发酵阳性（含疑似）管数、15 管法：最大接种量复发酵阳性管数、15 管法：中间接种量复发酵阳性管数、15 管法：最小接种量复发酵阳性管数、查表结果类型、12 管法：查表 A.1 所得 MPN 值、15 管法：查表 A.2 所得 MPN 值（每 100 mL）、粪大肠菌群数 C
- 质量控制
- 空白对照无任何变色反应、阳性/阴性对照反应正确、更换培养基批次时做阳性和阴性菌株检验、初发酵温度 37℃±0.5℃、初发酵培养 24 h±2 h、复发酵温度 44.5℃±0.5℃、复发酵培养 24 h±2 h、转接后 30 min 内放入培养箱、按所选方法录齐阳性管数（与接种量）、查表为确切值时已录入 MPN 值、复发酵阳性数不多于初发酵阳性（含疑似）数、12 管法查表核对（100 mL 阳性 0 瓶）、12 管法查表核对（100 mL 阳性 1 瓶）、12 管法查表核对（100 mL 阳性 2 瓶）、15 管法查表结果类型核对（0-0-0 为'＜2'，5-5-5 为'≥2400'，其余为确切值）、查表结果为确切值（界限值须人工表述）
- 计算公式
- 粪大肠菌群数 C、换算系数 100（=10×10 mL：MPN/100 mL→MPN/L 的 10 与 MPN 表最大接种量 10 mL）
- 记录信息（模板版本、打印时间、修改次数）
- 模板版本、打印时间、修改次数
- 签名
- 检测人、校核人、审核人
官方原文
公式、条款与限值以官方原文为准：生态环境部 标准文本页（HJ 347.2-2018 发布稿 PDF）。本页只写要点并注明条款号，不转载标准原文。
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在立方 LIMS 中使用本方法
立方 LIMS 的模板中心里有按 HJ 347.2-2018 预置的原始记录模板（草稿，未经持证人员抽检）：由本机构质量负责人审核、发布后即可使用。检测员当场录入读数，公式、修约和质控判定自动完成，算出的值不能手改，每次修改都保留原值、修改人、时间和原因。也可以在模板编辑器里复制后按本机构的作业指导书修改。
也可以先看使用教程。
编写与核对说明
编写与核对说明：立方 LIMS 依据官方原文编写，公式与条款逐条对照原文核对，计算示例由公式引擎实算；核对日期 2026-11-02。
本页由立方 LIMS 团队编写，正文由 AI（agent）起草，未经持证人员逐页审核；依据 HJ 347.2-2018，条款号见各处括注。示例为合成数据。标准状态于 2026-11-02 核查。2026-11-02 另做了一轮深度复查：页面上的每条说法逐条对照原文页面核对（已叠加修改单与勘误），每个计算值用独立程序按原文公式复算。发现错误请来电告诉我们。